Știri

JavaScript este în prezent dezactivat în browserul dvs.Unele caracteristici ale acestui site web nu vor funcționa dacă JavaScript este dezactivat.
Înregistrați-vă cu detaliile dvs. specifice și medicamentul de interes specific și vom asocia informațiile pe care le furnizați cu articolele din baza noastră de date extinsă și vă vom trimite prin e-mail imediat o copie PDF.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departamentul de Boli Infecțioase, Primul Spital afiliat al Universității Suzhou, orașul Suzhou, provincia Jiangsu, 215000 Tel.tumori ale sistemului digestiv cu o supraviețuire globală la 5 ani de 14,1%.Mulți pacienți cu CHC sunt diagnosticați într-un stadiu avansat, astfel încât screening-ul precoce este esențial pentru a reduce mortalitatea cauzată de CHC.În plus față de indicatorii de detecție utilizați în mod obișnuit, cum ar fi alfa-fetoproteina serică (AFP), alfa-fetoproteina reactivă la lectină a cristalinului (AFP-L3) și protrombina anormală (proteina II indusă de deficit de vitamina K, PIVKA-II), tehnici de biopsie fluidă S-a demonstrat că are valoare diagnostică în detectarea HCC.Comparativ cu procedurile invazive, biopsia fluidă poate detecta metaboliți maligni circulanți.Tehnicile de biopsie fluidă detectează celulele tumorale circulante, ADN-ul tumoral circulant, ARN-ul circulant și exozomii și sunt utilizate pentru screening-ul precoce, diagnosticul și evaluarea prognostică a HCC.Acest articol analizează biologia moleculară și aplicarea diferitelor tehnici de biopsie a fluidelor pentru a izola biomarkeri promițători care pot fi opțiuni viabile pentru evaluarea timpurie a HCC pentru a îmbunătăți screeningul precoce al grupurilor cu HCC cu risc ridicat.Cuvinte cheie: tehnica biopsiei fluidelor, carcinom hepatocelular, grup cu risc crescut.
Carcinomul hepatocelular (HCC) este o tumoare malignă comună a tractului digestiv, ocupând locul șase printre cazurile noi de tumori maligne atât la bărbați, cât și la femei.1 La nivel mondial, cancerul de ficat este a treia cauză de deces prin cancer după cancerul pulmonar și colorectal, reprezentând 8,3% din decesele cauzate de cancer din toate neoplasmele maligne.1 Prognosticul CHC este strâns legat de stadiul diagnosticului.Principalele motive pentru supraviețuirea slabă în HCC sunt metastazele intrahepatice, trombii tumorali venoase portale și metastazele la distanță care împiedică rezecția, iar multe dintre aceste caracteristici sunt deja prezente la pacienți la momentul diagnosticului.
Pe baza ghidurilor de diagnostic și tratament, principalii factori de risc pentru dezvoltarea HCC sunt ciroza hepatică, infecția cronică cu virusul hepatitei B (VHB) sau virusul hepatitei C (VHC), boala ficatului gras alcoolic și boala ficatului gras non-alcoolic (NAFLD). ).2 În plus, factorii de risc pentru HCC includ consumul de alimente contaminate cu aflatoxine, schistosomiaza, alte cauze de ciroză, antecedente familiale de cancer hepatic, diabet, obezitate, fumat și leziuni hepatice induse de medicamente.Grupurile cu risc ridicat de 35 și 45 de ani ar trebui să facă controale medicale regulate.Screeningul precoce este o strategie importantă de tratament timpuriu pentru a îmbunătăți supraviețuirea generală a pacienților cu HCC.
Biomarkeri precum AFP, AFP-L3 și PIVKA-II sunt recomandați pentru screeningul precoce al HCC3,4.Tehnicile de biopsie lichidă au arătat rezultate promițătoare în diagnosticul precoce și evaluarea tratamentului.5,6 S-au înregistrat progrese semnificative în biopsia lichidă a HCC, care poate avea sensibilitate și specificitate mai mare decât markerii serici utilizați în mod obișnuit, cum ar fi AFP (Tabelul 1).
AFP este un biomarker utilizat pe scară largă în HCC și este în prezent cel mai detaliat biomarker utilizat pe scară largă pentru screening-ul precoce, diagnosticul și evaluarea bolii.Un nivel persistent crescut de AFP este considerat un factor de risc pentru progresia HCC.7,8 Rata de detectare a carcinomului hepatocelular mic (sHCC) este în creștere odată cu dezvoltarea ultrasunetelor și a tomografiei computerizate, iar AFP s-a dovedit a fi deosebit de insensibilă la detectarea hHCC în practica clinică.Conform unui studiu retrospectiv multicentric9, AFP pozitiv a fost găsit în 46% (616/1338) din cazurile de CHC și 23,4% (150/641) din cazurile de CHC.În plus, nivelurile de AFP sunt crescute la pacienții cu boală hepatică cronică și ciroză.10 Astfel, AFP are un efect de screening limitat pentru sHCC.11 Conform Ghidurilor de practică clinică din Asia-Pacific pentru carcinomul hepatocelular, utilizarea AFP nu este recomandată.12 Dovezile clinice sugerează că PIVKA-II este superior AFP în tratamentul HCC și că combinația de PIVKA-II și AFP are o valoare diagnostică mai mare în HCC.13 Comparativ cu biopsia tisulară, biopsia fluidă detectează în primul rând metaboliții asociați tumorii în fluidele corporale (sânge, saliva, lichid pleural, lichid cefalorahidian sau urină) și este mai puțin invazivă pentru țesuturi.14 În plus, biopsiile lichide pot reflecta caracteristici maligne care nu sunt prezente în țesutul tumoral primar.15 Biopsiile lichide nu sunt încă testate în practica clinică pentru toate tipurile de tumori, dar potențialul lor de diagnostic în cancer atrage atenția oncologilor.16 Biopsia fluidă poate detecta celulele tumorale circulante (CTC), ADN-ul tumoral circulant (ADNc), ARN-ul liber circulant (ecRNA) și exozomii.În acest articol, vom discuta despre caracteristicile, rolul și aplicarea diferitelor tehnici de biopsie a fluidelor în screeningul precoce al grupurilor cu HCC cu risc ridicat.
ADN-ul extracelular (cfDNA) din probele de sânge de la indivizi sănătoși a fost descris pentru prima dată în 1948 de Mandel și colab.17 cfADN este un fragment de ADN fără celule cu lungimea de aproximativ 160-180 bp, care provine în principal din limfocite și celule mieloide.ctDNA este un fragment specific de ADN mutant eliberat de celulele tumorale în sângele periferic, care reprezintă informațiile genomice ale celulelor tumorale după anumite procese fiziopatologice, inclusiv necroza, apoptoza și excreția.Proporția de ctDNA în total cfDNA variază mult în funcție de tipul tumorii, iar fragmentele de cADN sunt raportate a fi de obicei mai mici de 167 bp în lungime.18 Studiul lui Underhill a arătat că fragmentele cfDNA sunt în general mai scurte decât cfDNA-ul normal.19 Comparativ cu indivizii sănătoși, lungimea totală a fragmentelor cfDNA din sângele pacienților cu cancer este mai scurtă, astfel încât cfDNA poate fi utilizat ca indicator al screening-ului precoce al tumorii.Îmbogățirea anumitor subseturi de lungimi de fragmente de cfADN poate îmbunătăți detectarea cADN-ului asociat cu tumorile solide nemetastatice.Studiile au arătat că ctDNA se găsește în peste 75% din cancerele avansate ale pancreasului, colonului, vezicii urinare, gastrointestinale, hepatice, ovariane, de sân, melanoame și de cap și gât.20,21 Cu toate acestea, cantitatea de ADNc din sânge depinde de localizarea tumorii.22 Într-un studiu realizat de Bettegoud, s-a constatat că pacienții cu cancer colorectal, mamar, hepatic, pulmonar și de prostată au niveluri mai mari de ADNc în sânge decât alte tipuri de cancer.În schimb, la pacienții cu cancer oral, cancer pancreatic, cancer gastric și gliom, concentrația de ADNc în sânge a fost mai mică.douăzeci și unu
Deoarece ctDNA conține aceleași mutații genetice ca și celulele tumorale primare, cADN-ul poate fi utilizat pentru a detecta mutații eterogene specifice tumorii și modificări epigenetice, inclusiv metilarea, hidroximetilarea, variațiile unui singur nucleotid și variațiile numărului de copii.douăzeci și trei
Metilarea ADN-ului este una dintre cele mai frecvente modificări epigenetice care au ca rezultat reprimarea genelor.În comparație cu celulele normale, există diferențe în nivelul general de metilare a genomului celulei tumorale, în special în metilarea genelor supresoare de tumori, care pot fi detectate într-un stadiu incipient, sugerând că modificările metilării ADN-ului pot fi un indicator al metilării precoce. depistarea tumorigenezei.Genele supresoare tumorale asociate cu HCC pot fi inactivate prin metilarea promotorului, stimulând astfel tumorigeneza.24 Metilarea ADN-ului este un marker ideal pentru diagnosticul precoce al tumorilor datorită specificității tisulare, detectabilității și independenței de vârstă.În plus, metilarea ADN-ului este mai frecventă în comparație cu mutațiile somatice, deoarece există mai multe regiuni țintă și mai multe site-uri CpG modificate în fiecare regiune a genomului țintă.25 În plus față de mai multe situsuri CpG, un număr mare de loci hipermetilați independenți în ADNc au fost identificați în DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 și RGS10.26 Xu și colab.Compararea probelor de cfDNA de la 1098 de pacienți cu HCC și 835 de martori sănătoși sa dovedit că genele asociate cu HCC se corelează puternic cu semnăturile corespunzătoare de metilare a ADNc-ului plasmatic.25 Pe baza analizelor de laborator, a fost dezvoltat un model predictiv care conține 10 markeri de metilare cu sensibilitate și specificitate de 85,7% și, respectiv, 94,3%, iar acești markeri au fost în mare măsură corelați cu masa tumorală, stadiul tumorii și răspunsul la tratament.Aceste rezultate indică faptul că utilizarea markerilor de metilare ADNc este foarte promițătoare în diagnosticul, monitorizarea și prognoza HCC.Într-un model de metilare constând din trei gene metilate aberant (APC, COX2, RASSF1A) și un miARN (miR203) prezentat de Lu și colab.27, sensibilitatea și specificitatea modelului 27 pentru diagnosticarea HCC asociată HBV au fost comparabile.80%.În plus, modelul ar putea detecta 75% dintre pacienții cu HCC nediagnosticați cu un nivel de AFP de 20 ng/mL.Gena pentru proteina 1A a familiei de domenii asociate cu Ras (RASSF1A) este principala secvență ADN repetitivă din genomul uman.Araujo şi colab.a concluzionat că hipermetilarea promotorului RASSF1A ar putea fi un biomarker valoros pentru screeningul precoce al HCC și o potențială țintă moleculară pentru terapia epigenetică.28 Într-un studiu, hipermetilarea promotorului RASSF1A seric a fost găsită la 73,3% dintre pacienții cu HCC.29 Elementul nucleotidic 1 intercalat lung (LINE-1) este un alt mediator de retrotranspunere foarte activ.Hipometilarea LINE-1 a fost găsită în ADN-ul a 66,7% din probele de ser HCC și a fost asociată cu recidive precoce și supraviețuire slabă după rezecția radicală.29 Hipermetilarea este un proces genetic comun care joacă un rol unic în dezvoltarea cirozei hepatice și a HCC.30 În schimb, hidroximetilarea este un proces de demetilare care induce reactivarea și exprimarea genelor, iar detectarea produsului 5-hidroximetilcitozină (5-hmC) în acest proces poate fi utilizată pentru a identifica o tumoră.Metilarea și hidroximetilarea ADNc sunt asociate cu tumorigeneză și pot contribui la screeningul precoce al HCC.Într-un studiu pe 2554 de subiecți, s-au găsit 31 de 5-hmC la nivelul genomului în probele de ADN-cf și 32 de gene au fost identificate prin compararea secvențelor 5-hmC la pacienții cu HCC și grupurile cu risc ridicat, cum ar fi cei cu boli cronice.Modele de diagnosticare a bolilor hepatice.si ciroza.Acest model a fost superior AFP în distingerea HCC de țesutul non-tumoral.
Mutațiile din regiunile de codificare pot duce la anomalii transcripționale, care pot duce la modificări ale secvențelor de proteine ​​și în cele din urmă la cancer.Variantele cu un singur nucleotide sunt markeri genomici importanți pentru screening-ul precoce al tumorii datorită fiabilității lor tisulare ridicate și specificității tumorale și tisulare ridicate.Numeroase studii legate de HCC care utilizează secvențierea de generație următoare (NGS) pentru secvențierea exomului și a întregului genom al cancerului au identificat gene celulare mutante comune, cum ar fi TP53 și CTNNB1, precum și câteva, inclusiv ARID1A, MLL, IRF2.Noile gene, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 și JAK1 prezintă rate moderate de mutație. Analiza funcției genelor mutante sugerează că modificările în remodelarea cromatinei, transducția semnalului Wnt/β-catenina și JAK/STAT, calea ciclului celular P53, modificatorii epigenetici, căile stresului oxidativ, calea PI3K/AKT/MTOR și calea RAS/RAF/ Calea kinazei MAPK joacă un rol crucial în oncogeneza HCC.32,33 Într-un studiu în care au fost detectate mutații asociate tumorii, Huang și colab. au descoperit că frecvența mutațiilor asociate tumorilor dependente de ctDNA a fost de 19,5%, iar specificitatea a fost de 90% .34 În plus, pacienții care au prezentat invazie vasculară au avut mai multe șanse de a avea mutații ctDNA (P=0,041) și supraviețuire fără recurență mai scurtă (P<0,001). Analiza funcției genelor mutante sugerează că modificările în remodelarea cromatinei, transducția semnalului Wnt/β-catenina și JAK/STAT, calea ciclului celular P53, modificatorii epigenetici, căile stresului oxidativ, calea PI3K/AKT/MTOR și calea RAS/RAF/ Calea kinazei MAPK joacă un rol crucial în oncogeneza HCC.32,33 Într-un studiu în care au fost detectate mutații asociate tumorii, Huang și colab. au descoperit că frecvența mutațiilor asociate tumorilor dependente de ctDNA a fost de 19,5%, iar specificitatea a fost de 90% .34 În plus, pacienții care au prezentat invazie vasculară au avut mai multe șanse de a avea mutații ctDNA (P=0,041) și supraviețuire fără recurență mai scurtă (P<0,001).Analiza funcției genelor mutante sugerează că schimbările în remodelarea cromatinei, semnalizarea Wnt/β-catenină și JAK/STAT, calea ciclului celular P53, modificatorii epigenetici, căile stresului oxidativ, calea PI3K/AKT/MTOR și calea kinazei RAS/RAF/MAPK joacă un rol critic în tumorigeneza HCC.32,33 Într-un studiu care a găsit mutații asociate tumorii, Huang și colab.a constatat că frecvența mutațiilor asociate tumorilor dependente de ctDNA a fost de 19,5% și specificitatea a fost de 90%..34 кроя aproximativ т, у пациентов с сосуmant îl .34 În plus, pacienții cu invazie vasculară au avut mai multe mutații ADNc (P=0,041) și o supraviețuire fără boală mai scurtă (P<0,001).Analiza funcțională a genelor mutante a relevat remodelarea cromatinei, semnalizarea Wnt/β-catenina și JAK/STAT, calea ciclului celular P53, modificatorii epigenetici, calea stresului oxidativ, calea PI3K/AKT/MTOR și RAS/RAF/MAPK. calea kinazei joacă un rol critic în oncogeneza HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， Huang 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 频率 为 19,5% ， 特异性 为 为 90% .34 此外 ， 经历 血管 侵犯 的 患者 更 有 可能 发生 发生 ctdna突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 Într-un studiu care a descoperit mutații asociate tumorilor, Huang și colab.a constatat că mutațiile asociate tumorii au fost dependente în proporție de 19,5% de ADNc, cu o specificitate de 90% 34. În plus, pacienții care au suferit invazie vasculară au avut mai multe șanse de a dezvolta ADNc.мутация (P = 0,041) și более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutație (P=0,041) și supraviețuire mai scurtă fără boală (P<0,001).O altă genă conducătoare comună a HCC este TP53, care are o rată de mutație de peste 30%.Studiile au arătat că frecvența mutațiilor TP53 în ctDNA în sânge și urină variază de la 5% la 60%.35 Studiul lui Johan a arătat că spectrul de mutații ctDNA în HCC tardiv are o rată de mutație similară cu HCC precoce, incluzând promotorul TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutații în AXIN1 ., ARID2, KMT2D și TSC2 (6% fiecare).36 Oncogena β-catenină (CTNNB1) joacă un rol important în calea de semnalizare Wnt.Coactivatorul de transcripție CTNNB1 poate promova expresia genelor, ceea ce poate duce la proliferarea celulară, inhibarea apoptozei și angiogeneza.CTNNB1 poate interacționa, de asemenea, cu TERT pentru a induce transformarea hepatocitelor.33 Promotorul TERT este frecvent mutat în unele tumori solide.Modificările TERT, una dintre cele mai timpurii modificări genetice în transformarea malignă a HCC, pot duce la reactivarea telomerazei în hepatocitele cirotice și pot promova proliferarea și prevenirea îmbătrânirii.S-a raportat că mutații în promotorul 33-37 TERT apar la 59-90% dintre pacienții cu noduli hepatici proliferativi și HCC precoce și sunt asociate cu supraviețuirea.38
Modificările numărului de copii (CNA) sunt un subtip important de mutații somatice.Cercetările au arătat că sarcina răspândită și focală a CNA este o semnătură genomică capabilă să prezică infiltrarea și excluderea imună a tumorii în unele tipuri de cancer.39 Semnalizarea activă a infiltrației, activitate citolitică ridicată, inflamație severă și markeri genetici asociați cu prezentarea antigenului în HCC.Analiza matricei de date a polimorfismelor cu un singur nucleotide la 477 de subiecți a relevat o sarcină scăzută asupra SNC.În schimb, tumorile instabile cromozomial cu o încărcare mare extinsă de CNA au prezentat semne de respingere imună și au fost asociate cu proliferarea, repararea ADN-ului și disfuncția TP53.Xu și colab.a arătat că grupul cu HCC a avut scoruri CNA mai mari decât grupul cu boală hepatică cronică.40 Folosind secvențierea întregului genom a unei singure celule, s-a descoperit că CNA-urile apar devreme în hepatocarcinogeneză și rămân relativ stabile în timpul progresiei tumorii.41 Chung și colab.a constatat că nivelurile de cfDNA au fost semnificativ crescute la pacienții cu HCC și că CNA-urile la nivelul genomului din cfDNA au fost un marker de prognostic independent important la pacienții cu HCC tratați cu sorafenib.42 Pacienții cu o sarcină mai mare de CNA au fost mai susceptibili de a avea progresia bolii și deces decât cei cu o povară mai mică de CNA.Ollerich şi colab.a constatat că indicele de instabilitate a numărului de copii (CNI) poate fi utilizat pentru a evalua CNA în cfDNA la pacienții cu cancer.Ei au observat că pacienții cu cancer avansat au avut scoruri CNI semnificativ mai mari decât un grup de control, care evaluează răspunsul pacientului la chimioterapie sistemică și imunoterapie.43 Aceste rezultate sugerează că CNA găsite în probele de biopsie lichidă pot servi ca indicatori de prognostic la pacienții cu cancer avansat.HCC pe fundalul terapiei sistemice.
În prezent, metodele utilizate pentru detectarea ctDNA pot fi împărțite în metode țintite și non-țintite.Pe scurt, metodele vizate, cum ar fi reacția digitală în lanț a polimerazei (dPCR), PCR digitală BEAMing, Sistemul de mutații refractare de amplificare-PCR, Capp-Seq și Tam-Seq sunt foarte sensibile la genele predefinite.Metodele în afara țintă, cum ar fi secvențierea întregului genom și NGS oferă o vedere cuprinzătoare a întregului peisaj genomic.44 În comparație cu panourile țintă, secvențierea întregului genom poate detecta nu numai mutații punctuale și inserții, ci și rearanjamente și variații ale numărului de copii.prognosticul, iar CTC și cfDNA sunt indicatori buni care pot fi utilizați pentru monitorizarea dinamică a HCC.45 În plus, analiza cfDNA poate fi mai utilă în detectarea HCC.Yan şi colab.a arătat că cfDNA din plasma pacienților cu HCC a fost semnificativ mai mare decât la pacienții cu fibroză hepatică și martori sănătoși.În comparație cu AFP, ctDNA este de așteptat să fie un marker de screening mai bun pentru HCC precoce.46 Într-un studiu prospectiv pe 47 de biopsii lichide care au testat cfDNA și proteine ​​într-o populație, s-au dovedit a fi eficiente în diferențierea pacienților cu HCC de pacienții fără HCC.Într-o urmărire a 331 de pacienți cu ultrasunete normali și AFP-negativi, sensibilitatea și specificitatea cfDNA pentru diagnosticarea HCC au fost de 100%, respectiv 94%, astfel încât ADNc-ul a putut detecta HCC la indivizii asimptomatici seropozitivi HBsAg.În studiul Yeo48, la pacienții cu HCC a fost găsită o frecvență ridicată (92,5%) de hipermetilare a promotorului RASSF1A.În plus, Xu și colab.a creat un model de diagnostic pentru a prezice HCC folosind un panou de markeri specifici de metilare cu o specificitate și o sensibilitate de 90,5% și, respectiv, 83,3%.Panoul permite pacienților cu HCC să fie distinși de pacienții cu alte boli hepatice, ceea ce este mai bun decât AFP.De asemenea, au descoperit că controalele normale care au fost testate pozitiv pot avea factori de risc pentru HCC, cum ar fi infecția cu VHB sau antecedentele de consum de alcool.25 Emitem ipoteza că factorii de risc ridicat pentru HCC pot promova hipermetilarea cfDNA, care apoi contribuie la progresia HCC și, astfel, cfDNA poate juca un rol cheie în screening-ul pentru grupurile cu risc ridicat.Cai și colab.rezumă întreaga gamă de mutații ctDNA și oferă o strategie robustă pentru evaluarea sarcinii tumorale la pacienți.49 Această strategie poate identifica tumorigeneza cu o medie de 4,6 luni înainte de modificarea imagistică și a demonstrat performanțe diagnostice superioare în comparație cu biomarkerii serici AFP, AFP-L3 și PIVKA-II.Valoarea diagnostică a testării ADNc a fost demonstrată atunci când evaluarea imaginii nu este disponibilă, astfel încât testarea ADNc este de valoare în diagnosticarea HCC precoce în grupurile cu risc ridicat.Recent, oamenii de știință au folosit tehnologia NGS pentru a analiza indicatorii variației genetice multivariate (inclusiv 5-hidroximetilcitozină, 5′-motiv, fragmentare, urme de nucleozomi, HIFI) în 3204 probe clinice și cfDNA.50 de modele HIFI revalidate cu trei seturi de tren, de testare și de testare independente au arătat o discriminare stabilă și fiabilă între populațiile HCC și non-HCC, cu o sensibilitate de 95,79% și, respectiv, 95,42% în seturile de testare și de testare specifice HCC.Sexele au fost de 95,00%, respectiv 97,83%.Valoarea diagnostică a metodei HIFI este mai mare decât cea a AFP în deosebirea HCC de ciroză.În plus, ctDNA este utilizat și în tratamentul chirurgical.Atsushi și colab.a determinat nivelurile serice preoperatorii de ADNc la pacienții cu HCC și a constatat că rata de recurență și rata metastazelor extrahepatice în grupul ADNc pozitiv au fost semnificativ mai mari decât în ​​grupul ADNc negativ, iar nivelurile ADNc au fost semnificativ corelate.cu progresia tumorii.51 Fiind un biomarker foarte sensibil, ctDNA poate prezice capacitatea HCC de a invada vasele.Wang şi colab.a efectuat secvențierea întregului genom a 46 de pacienți cu HCC, iar analiza multivariată a arătat că valoarea prag a frecvenței alelelor variantei cADN pentru invazia în microvase este de 0,83%, sensibilitatea 89,7% și specificitatea 80,0%.un factor de risc independent pentru invazia microvasculară în HCC rezecabil, sugerând că ADNc poate ajuta la ghidarea tratamentului optim.În concluzie, ctDNA este pe deplin implicat în apariția și dezvoltarea HCC și poate fi utilizat pentru screening-ul precoce, evaluarea chirurgicală și monitorizarea bolii.
CTC sunt celule maligne derivate din tumori primare sau metastaze care metastazează în fluxul sanguin.Celulele tumorale secretă metaloproteinaze ale matricei (MMP), care descompun membrana bazală, permițând celulelor tumorale să intre direct în vasele de sânge și limfatice.Cu toate acestea, majoritatea CTC sunt eliminate rapid prin anoikis, atac imun sau stres de forfecare.53 Tranziția epitelial-mezenchimală (EMT) permite CTC să fie ușor izolate din țesutul tumoral primar, să invadeze capilarele și să dobândească o supraviețuire semnificativ îmbunătățită, metastaze, invazive și rezistență la medicamente.Studiile au arătat că există o profundă eterogenitate între diferitele celule tumorale în tumorile metastatice primare.Astfel, analiza CTC poate duce la o înțelegere cuprinzătoare a eterogenității celulelor tumorale.54
Markerii specifici pentru CTC-uri asociate cu HCC includ glipican-3 (GPC3), receptorul de asialoglicoproteină (ASGPR), molecula de adeziune a celulelor epiteliale (EpCAM) și markeri asociați celulelor stem, cum ar fi CD44, CD90, 55 și molecula de adeziune intercelulară 1 (ICAM1).) .56 Markerul GPC3 este o proteină ancorată la membrana celulară care este utilizată clinic pentru analiza patologică și caracterizarea HCC.57 Exprimarea GPC3 este mai frecventă în celulele tumorale HCC cu diferențiere intermediară și scăzută și promovează migrarea extrahepatică;în plus, prezența CTC-urilor GPC3+ indică HCC metastatic.58 ASGPR este o proteină transmembranară exprimată numai pe suprafața hepatocitelor și este foarte exprimată în HCC bine diferențiat.EpCAM este una dintre cele mai frecvent utilizate proteine ​​asociate membranei pentru a captura CTC.EpCAM a fost identificat ca un marker de suprafață al celulelor HCC cu caracteristici ale celulelor stem,59 care se corelează cu diferite caracteristici clinicopatologice ale HCC, cum ar fi invazia vasculară, nivelurile evaluate de AFP și stadiul avansat al cancerului hepatic la Spitalul din Barcelona (BCLC).Fenotipul 60 CTC EMT este foarte metastatic.54 Procesele EMT din CTC promovează metastaza HCC.Exprimarea markerilor EMT, cum ar fi vimentin, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, melc, melc și E-cadherin au fost studiate în CTC-uri derivate din ficat de la pacienții cu HCC.58 Sistemul CanPatrol™ dezvoltat de Cheng [61] a clasificat CTC-urile în trei subgrupe fenotipice pe baza markerilor exprimați predominant: fenotipul epitelial (EpCAM, CK8/18/19), fenotipul mezenchimal (vimentină, încolăcit) și fenotipurile mixte.La 176 de pacienți, CTC total a fost superior AFP în diferențierea HCC de boala hepatică benignă.Valorile AUC pentru CTC total, AFP și CTC total combinat și AFP au fost 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) și 0,821 (95% CI, 0,756–0,88) ).), respectiv.Clasificarea CTC bazată pe EMT poate prezice diagnosticul HCC, recurența precoce, metastazele și un timp general mai scurt.
În prezent, metodele de detectare a CSC includ metode fizice și metode biologice.Metodele fizice, denumite adesea îmbogățire bazată pe proprietăți biofizice, depind în principal de proprietățile fizice ale CSC, cum ar fi dimensiunea, densitatea, sarcina, mobilitatea și deformabilitatea.În funcție de proprietățile fizice, există diverse metode precum sisteme bazate pe filtrare, dielectroforeza etc. Aceasta din urmă, cunoscută și sub numele de îmbogățire pe bază de imunoafinitate, se bazează în principal pe legarea antigen-anticorp, deoarece metoda folosește anticorpi împotriva biomarkerilor specifici tumorii. cum ar fi EpCAM, ASGPR, receptorul 2 al factorului de creștere epidermic uman (HER2), antigenul specific de prostată (PSA), pancitocheratina umană (P-CK) și carbamoil fosfat sintetaza 1 (CPS1).62 Un alt tip, numit metoda fără îmbogățire, folosește citometria în flux pentru a diferenția CTC de leucocite pe baza unui raport nuclear-citoplasmatic mai mare și a unei dimensiuni mai mari.În prezent, singurul test aprobat de FDA pentru detectarea CTC este sistemul Cell-Search™, care utilizează markerul de suprafață celulară EpCAM. Cu toate acestea, detectarea CTC pe bază de markeri combinați ar putea crește rata de pozitivitate.54 Un amestec de anticorpi împotriva ASGPR și CPS1 a atins o rată de detectare a CTC de 91% la pacienții cu HCC.63 Zhang și colab. au folosit un CTC-Chip cu anticorpi împotriva ASGPR, P. -CK și CPS1 și a diferențiat pacienții cu HCC de cei cu boală hepatică benignă sau cancer non-HCC într-o rată de 100%.64 Un studiu realizat de Wang a detectat CTC EpCAM+ la 60% din 42 de pacienți cu HCC și a găsit corelații semnificative între ambele pozitivitate. rata și numărul de CTC cu stadiul TNM.65 Guo și colab. au descoperit că un scor PCR derivat din CTC a fost crescut la 125/171 (73%) pacienți al căror nivel de AFP a fost <20 ng/mL cu o sensibilitate de 72,5% și un specificitate de 95,0%, comparativ cu 57,0% și 90,0% pentru AFP la o limită de 20 ng/mL.66 Combinația de AFP și CTC poate îmbunătăți detectarea HCC.45 Se crede că CTC-urile au un avantaj față de AFP în screening-ul precoce al grupurilor. cu risc ridicat de HCC. Cu toate acestea, detectarea CTC pe bază de markeri combinați ar putea crește rata de pozitivitate.54 Un amestec de anticorpi împotriva ASGPR și CPS1 a atins o rată de detectare a CTC de 91% la pacienții cu HCC.63 Zhang și colab. au folosit un CTC-Chip cu anticorpi împotriva ASGPR, P. -CK și CPS1 și a diferențiat pacienții cu HCC de cei cu boală hepatică benignă sau cancer non-HCC într-o rată de 100%.64 Un studiu realizat de Wang a detectat CTC EpCAM+ la 60% din 42 de pacienți cu HCC și a găsit corelații semnificative între ambele pozitivitate. rata și numărul de CTC cu stadiul TNM.65 Guo și colab. au descoperit că un scor PCR derivat din CTC a fost crescut la 125/171 (73%) pacienți al căror nivel de AFP a fost <20 ng/mL cu o sensibilitate de 72,5% și un specificitate de 95,0%, comparativ cu 57,0% și 90,0% pentru AFP la o limită de 20 ng/mL.66 Combinația de AFP și CTC poate îmbunătăți detectarea HCC.45 Se crede că CTC-urile au un avantaj față de AFP în screening-ul precoce al grupurilor. cu risc crescut de HCC.Totuși, detectarea combinată bazată pe markeri a CTC poate crește procentul de rezultate pozitive.54 Un amestec de anticorpi anti-ASGPR și CPS1 a atins o rată de detecție a CTC de 91% la pacienții cu HCC.63 Zhang și colab.a folosit un CTC-Chip cu anticorpi împotriva ASGPR, P-CK și CPS1 și, de asemenea, a distins pacienții cu HCC de cei cu boală hepatică benignă sau non-HCC la o rată de 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. frecvența și numărul de CTC cu stadiu TNM.65 Guo și colab. au descoperit că PCR derivat din CTC a fost crescută la 125/171 (73%) pacienți care aveau niveluri de AFP <20 ng/mL cu o sensibilitate de 72,5% și o specificitate de 95,0% comparativ cu 57,0% și 90,0% pentru AFP la un nivel limită de 20 ng/mL.66 Combinația de AFP și CTC poate îmbunătăți detectarea HCC.45 CTC-urile sunt considerate a avea un avantaj față de AFP în screening-ul precoce. grupuri.cu risc crescut de HCC.Cu toate acestea, detectarea combinată bazată pe markeri a CTC poate crește procentul de rezultate pozitive.54 Un amestec de anticorpi anti-ASGPR și CPS1 a atins o rată de detecție a CTC de 91% la pacienții cu HCC.63 Zhang și colab.au folosit cipuri CTC cu anticorpi împotriva ASGPR, P-CK și CPS1 și au distins pacienții cu HCC de boala hepatică benignă și non-HCC cu 100%.64 Studiul lui Wang a identificat 60% din CTC EpCAM+ la 42 de pacienți cu HCC și a găsit o corelație semnificativă între incidența și numărul de CTC în stadiul TNM. 65 Guo 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 ， ， 敏感性 为 为 为 为 截止 截止 截止 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 截止 截止 截止 特异性 为 为 为 为 为 95,0%， 而 AFP 在 截止 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 的 为 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo şi colab.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. a constatat că la 125/171 (73%) pacienți cu niveluri de AFP <20 ng/mL, valorile PCR derivate din CTC au fost crescute cu o sensibilitate de 72,5% și o specificitate de 95,0%, în timp ce AFP a fost la specificitatea limită. a fost de 20 ng/ml.ml a fost de 57,0% și 90,0%.66 Combinația dintre ORP și CTC îmbunătățește detectarea HCC.Se crede că 45 CTC sunt superioare AFP în screeningul precoce al populațiilor cu HCC cu risc ridicat.Astfel, pentru grupurile cu HCC CTC-pozitive și cu risc ridicat, testarea CTC ar trebui să fie combinată în mod obișnuit cu ultrasunete și detectarea AFP.Cu toate acestea, CTC-urile sunt considerate predictori importanți ai metastazei tumorale și a recidivei, iar detectarea CTC-urilor nu este recomandată în mod independent ca instrument de diagnostic.62 Prin urmare, CTC poate servi ca un biomarker predictiv mai bun decât alți markeri utilizați în prezent. Zhou și colab. au descoperit că pacienții cu un număr crescut de CTC EpCAM+ și celule T reglatoare au prezentat un risc mai mare de a dezvolta recurență a HCC, decât cei cu un număr scăzut de CTC, cu un raport de recurență de 66,7% față de 10,3% (P < 0,001).67 Un studiu similar a fost raportat de Zhong et al.68 În plus, Qi a descoperit că 101 din 112 pacienți (90,81%) cu HCC, inclusiv cei cu boală în stadiu incipient, au fost pozitivi pentru CTC și că noduli HCC foarte mici au fost detectați după 3 ani. la 5 luni de urmărire. Zhou și colab. au descoperit că pacienții cu un număr crescut de CTC EpCAM+ și celule T reglatoare au prezentat un risc mai mare de a dezvolta recurență a HCC decât cei cu un număr scăzut de CTC, cu un raport de recurență de 66,7% față de 10,3% (P < 0,001).67 A studiu similar a fost raportat de Zhong et al.68 În plus, Qi a constatat că 101 din 112 pacienți (90,81%) cu HCC, inclusiv cei cu boală în stadiu incipient, au fost pozitivi pentru CTC și că noduli HCC foarte mici au fost detectați după 3 până la 5 luni de urmărire. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou și colab. au descoperit că pacienții cu CTC-uri EpCAM+ crescute și celule T reglatoare au avut un risc mai mare de recurență a HCC decât cei cu CTC scăzute, cu o rată de recurență de 66,7% față de 10,3% (P<0,001)67.Un studiu similar a fost realizat de Zhong et al.68. În plus, Qi a constatat că 101 din 112 pacienți (90,81%) cu HCC, inclusiv cei cu boală precoce, aveau CTC și că noduli HCC foarte mici au fost detectați după 3 până la 5 luni de urmărire. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou şi colab.a constatat că pacienții cu CTC-uri EpCAM+ crescute și celule T reglatoare au avut un risc mai mare de recurență a HCC în comparație cu pacienții cu mai puține CTC, cu rate de recurență de 66,7% și, respectiv, 10,3% (P <0,001).Un studiu similar a fost raportat de Zhong et al.68 În plus, Qi a constatat că 101 din 112 pacienți cu HCC (90,81%), inclusiv pacienții cu boală precoce, au avut rezultate pozitive CTC și au găsit noduli HCC foarte mici după 3 vizite.Observație până la 5 luni.De asemenea, au găsit CTC la 12 pacienți cu infecție cronică cu VHB și au găsit tumori mici cu HCC în decurs de 5 luni la 2 pacienți cu CTC pozitiv.69 Astfel, CTC-urile pot fi utilizate pentru a prezice HCC, 70 dar pot fi utilizate mai de rutină ca biomarkeri predictivi.
La fel ca cfDNA, cfRNA este eliberat în fluxul sanguin prin diferite sisteme.Aceste molecule din sângele periferic reprezintă țesutul canceros de origine.În comparație cu markerii detectați prin metode non-invazive, cfRNA-urile sunt mai reglate dinamic, mai specifice țesuturilor și mai abundente în mediul extracelular.Semnificația și valoarea diagnostică a 71 de miARN (miARN) în HCC au fost raportate în multe studii.miARN-urile sunt ARN-uri endogene non-coding (ARNnc) care reglează diverse activități biologice moleculare prin inhibarea translației ARN-urilor mesager țintă (ARNm).miARN-urile sunt localizate în corpurile apoptotice încapsulate în exozomi, dar se pot lega stabil și de proteinele serice și lipidele din sângele periferic și pot fi utilizate pentru a evalua HCC.microARN-urile sunt implicate în regenerarea ficatului, metabolismul lipidelor, apoptoză, inflamație și dezvoltarea HCC.72 MiARN-urile oncogene cum ar fi miR-21, miR-155 și miR-221 sunt bine cunoscute în HCC.În special, miR-21 joacă un rol cheie în sinteza colagenului în matricea extracelulară și fibroză și promovează hepatocarcinogeneza prin activarea celulelor stem hematopoietice.72,73 MiARN-urile supresoare de tumori în HCC includ miRNA-122, miRNA-29, familia Let-7 și familia miRNA-15.Familia Let-7 constă din multe miARN supresoare de tumori care vizează familia RAS.Familia miR-15 include miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 și miR-497, care au secvențe complementare pentru anumite ARNm.În plus, ARN-urile lungi necodante (lncRNAs) și ARN-urile circulare (cirRNAs) sunt, de asemenea, importante pentru screeningul precoce al HCC.ARNncl reprezintă cea mai largă clasă de ARNnc, inclusiv ARNnc asemănător ARNm și sunt implicate în patogeneza multor boli umane.LncRNA-urile joacă un rol de reglare în micromediul hepatic și în bolile hepatice cronice.74 CircARN-urile sunt, de asemenea, o clasă de ncARN cu funcții multiple în reglarea expresiei genelor.Recent, circRNA-urile au fost considerate instrumente de diagnosticare pentru HCC.
ARN-ul liber circulant are o stabilitate remarcabilă, inclusiv rezistența la temperatură, pH și RNază, ceea ce face izolarea ARNfn din sângele periferic mai puțin obositoare folosind metodele standard de purificare a ARN.Cele mai frecvent utilizate metode includ NGS, microarray și RT-qPCR.NGS permite măsurarea microARN-urilor în întregul genom.Cu toate acestea, această metodă este costisitoare și analiza nu este standardizată.În schimb, RT-qPCR este ieftină, amplifică rapid acizii nucleici și oferă multe avantaje, cum ar fi sensibilitate mai mare, precizie mai mare, interval dinamic mai larg și necesită mai puține probe.Micromatricele sunt o altă metodă utilizată pentru detectarea miARN bazată pe hibridizarea sensibilă și specifică a miARN-urilor țintă cu sonde ADN complementare, 75 dar analiza datelor de microarray necesită mult timp.
MiR-122 și Let-7 circulante au fost raportate a fi potențial utile în diagnosticarea HCC în stadiu incipient la grupurile cu risc ridicat, markeri la pacienții cu noduli premaligni asociați VHB și HCC în stadiu incipient.76 Cai et al.a constatat că membrii familiei Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 și miR-199a/b) sunt expuși riscului de cronicizare. HCC la pacienții cu hepatită.Familia Let-7 poate servi ca un biomarker surogat eficient pentru prezicerea dezvoltării HCC în grupurile cu risc ridicat asociate cu hepatita cronică C. 77 miR-122 are o acuratețe diagnostică ridicată în detectarea precoce a HCC la pacienții cu ciroză hepatică.78 MiR-107 circulant în ser a fost, de asemenea, evaluat în stadiile incipiente ale HCC, 79 și a demonstrat un potențial bun în populațiile cu risc ridicat.Zhou et al au raportat că un grup de miARN (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a și miR-801) poate diferenția HCC de hepatita cronică B (CHB) și ciroză. sensibilitatea a fost de 79,1% și 75%, iar specificitatea de 76,4% și, respectiv, 91,1%.80 În HCC legat de VHB, am constatat că nivelurile de miR150 au fost semnificativ reduse în comparație cu cele de la pacienții cronici cu VHB fără HCC (sensibilitate 79,1%, specificitate 76,5%).-224 a fost crescut în HCC în comparație cu martorii sănătoși, iar analizele de subgrup au arătat niveluri mai mari la pacienții cu HCC asociat cu VHB.Pacienții cu ciroză asociată cu hepatită B și cu HCC au identificat un clasificator siRNA care conține șapte siARN-uri exprimate diferențial care pot detecta HCC la diferite controale;Intervalul AUC la screeningul precoce este mai bun decât voluntarii AFP.Ei au descoperit că patru miARN (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p și miR-365a-3p) ar putea distinge pacienții cu HCC de pacienții fără HCC.Cinci miARN-uri supraexprimate (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p și miR-148a-3p) sunt considerate potențiale infecții cu VHB în HCC, ciroză și biomarkeri CHB, în special miR-34a-5p poate fi biomarkeri pentru ciroza hepatică85 și pot fi potențiali biomarkeri pentru screeningul precoce al HCC la populațiile cu risc ridicat.Cel mai studiat lncARN din HCC este puternic activat în cancerul hepatic (HULC).Alte studii au arătat că HULC care circulă la pacienții cu HCC poate fi utilizat ca marker de diagnostic deoarece acest lncRNA este puternic reglat la pacienții cu HCC în comparație cu indivizii sănătoși.71,86 Printre alte lnRNA-uri, LINC00152 este considerat cel mai bun lncRNA de diagnostic datorită ASC, sensibilității și specificității sale ridicate.86 Într-un studiu, expresia LINC00152 în sângele periferic a crescut treptat de la controalele normale sănătoase la pacienții cu CHB și ciroză și, în cele din urmă, a fost cea mai mare în HCC.Studiile privind expresia circSMARCA5 în plasma pacienților cu HCC au arătat o scădere progresivă a expresiei HCC variind de la hepatită la ciroză și leziuni precanceroase.87 Analiza curbelor ROC a confirmat potențialul acestor ARN-uri în a distinge pacienții cu hepatită sau ciroză hepatică de cei cu HCC, în special cei cu niveluri de AFP sub 200 ng/mL.În plus, Zhu a analizat 13.617 ARN-uri ciclice în probe de plasmă de la pacienții cu HCC asociați cu HBV și a confirmat că 6 ARN-uri ciclici au fost exprimați diferit în HCC și ciroza asociată HBV, sugerând că ARNc-urile pot fi benefice.markeri pentru screeningul precoce al grupurilor cu risc ridicat, cum ar fi cele asociate cu boli hepatice, pacienți cu scleroză.88
Exozomii sunt vezicule membranare cu un diametru de 40–160 nm;veziculele intracelulare multiple fuzionează cu membrana celulară și sunt eliberate în matricea extracelulară.Acestea conțin multe componente active, inclusiv lipide, proteine, ARN și ADN și joacă un rol cheie în comunicarea dintre celule, atât celule HCC, cât și celule non-HCC.89,90 Exozomii reglează progresia HCC prin activarea fibroblastelor hepatocitelor și a celulelor stelate, a celulelor imune, a hepatocitelor normale și a celulelor HCC.91 În micromediul tumoral, celulele tumorale produc un număr mare de exozomi care sunt transportați de la celulele canceroase la celulele imature, care la rândul lor sunt implicate în oncogeneză, degradare și semnalizare celulară.92 Studiile au arătat că exozomii pot transfera oncogene celulelor normale în timpul proceselor patologice, care poate fi unul dintre mecanismele invaziei tumorale și metastazelor.93 Rolul exozomilor în progresia cancerului poate fi dinamic și specific tipului de cancer, 89 Exozomii pot fi interiorizați de celule adiacente sau îndepărtate pentru a regla gene țintă multiple în celulele primitoare care pot fi implicate în ionii de comunicare intercelulară și interacțiunile micromediului celular; mediază semnalizarea celulară și metabolismul.94 Caracteristicile și modificările dinamice ale moleculelor de marfă exozomale reflectă în mod direct caracteristicile și modificările dinamice ale celulelor tumorale parentale,95 care este, de asemenea, baza pentru utilizarea exozomilor în diagnosticul și prognosticul cancerului, precum și pentru prezicerea răspunsului individual la terapia anticancer. ..96
Metodele tradiționale de laborator pentru izolarea și analiza exozomilor sunt complexe, în mai multe etape și consumatoare de timp, incluzând ultracentrifugarea, filtrarea, cromatografia de excludere a mărimii, purificarea prin imunoafinitate, Western blot, testul imunosorbent legat de enzime (ELISA), PCR și analiza fluxului.sisteme miniaturizate și platforme lab-on-a-chip care utilizează micro/nanotehnologie sunt dezvoltate pe scară largă pentru izolarea rapidă și convenabilă in situ a exozomilor.Analiza de urmărire a nanoparticulelor (NTA) este o metodă utilizată pe scară largă pentru caracterizarea dimensiunii și concentrației exozomilor, inclusiv metode precum nanoparticulele magnetice și polihidroxialcanoații.De asemenea, metodele microfluidice și electrochimice pot detecta rapid exozomii cu randamente ridicate.
Proteinele exosomale sunt markeri importanți pentru diagnosticul HCC.În studiul Arbelaiz, nivelul proteinei de legare RasGAP SH3 98 (G3BP) și al receptorului polimeric de imunoglobuline (PIGR) a fost semnificativ crescut în exozomii derivați de HCC, iar eficacitatea combinată presupusă a celor două proteine ​​a fost superioară celei a AFP.Supraîncărcarea cu fier este un factor important care contribuie la dezvoltarea HCC.Tseng a raportat că hepcidina poate juca un rol cheie în rezistența la HCC.99 Exozomii derivați din serurile pacienților cu HCC au avut un număr de copii semnificativ mai mare de variante de ARNm de hepcidină decât omologii lor sănătoși, ceea ce sugerează că hepcidina poate fi un biomarker de diagnostic nou pentru HCC.Proteina 14-3-3ζ din exozomi produși de 100 HCC poate reduce activarea, proliferarea și diferențierea celulelor T și poate induce transformarea celulelor T în celule T reglatoare, ducând la epuizarea celulelor T.101 Acest lucru este susținut de mai multe studii care investighează evaziunea tumorii de la supravegherea imună, 102 care pot contribui la tumorigeneza HCC.
În plus față de prezența ecRNA în plasmă sau ser, exozomii îmbogățiți cu ARN pot fi utilizați pentru stadializare neinvazivă în timp real în screening-ul precoce al tumorii și pentru a determina evoluția tumorii și răspunsul la terapie.Nivelul miRNA-21 exosomal în serul sanguin în grupul HCC a fost de 2,21 ori mai mare decât în ​​grupul CHB, iar în grupul HCC a fost de 5,57 ori mai mare decât în ​​populația sănătoasă.În studiul Wang, exozomii au crescut semnificativ HCC în comparație cu pacienții cu ciroză, cu valori ASC de 0,83 (95% CI 0,74–0,93) și 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Datele obținute au elucidat implicarea moleculelor specifice de încărcătură exosomală în reglarea oncogenezei și progresiei HCC.105 Expresia serică a miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 și miR-26a este consecventă.și metastaze, iar nivelurile miR21 au fost mult mai mari la pacienții cu HCC decât la martorii sănătoși și, de asemenea, la pacienții cu CHB.102 LncRNA a avut valoare de diagnosticare potențială în HCC.Studiile au arătat că exozomii derivați din serurile pacienților cu HCC au niveluri semnificativ mai mari de LINC00161, LINC000635 și lncARN activate prin transformarea factorului de creștere-β decât la pacienții fără HCC, iar aceste lncARN sunt puternic asociate cu stadiul TNM și volumul tumorii.110 Conigliaro et al.S-a descoperit că exozomii CD90+ exprimă niveluri ridicate de lncRNAH19, care a crescut semnificativ eliberarea factorului de creștere endotelial vascular (VEGF) și producția de receptori VEGF-R1, stimulând astfel angiogeneza.93 CircARN-urile sunt un alt tip de ncRNA exosomale - exprimate la niveluri mai scăzute, dar stabile între specii, circARN-urile arată, de asemenea, specificitate pentru tipul de celulă, tipul de țesut, stadiul de dezvoltare și activitatea de reglare.111 circRNA sunt biomarkeri de diagnostic pentru cancerul precoce și minim invaziv.112 Studii clinice recente au arătat că specificitatea miARN-urilor individuale în prezicerea HCC nu este ideală.Prin urmare, detectarea complexă folosind teste multiple (de exemplu, miR-122 și miR-48a în combinație cu AFP) poate îmbunătăți identificarea HCC precoce și diferențierea HCC de ciroză.100
Pacienții cu CHB și ciroză hepatică sunt cel mai frecvent grup cu risc ridicat pentru dezvoltarea HCC.Pentru grupurile cu risc ridicat, odată ce s-a obținut un răspuns virusologic susținut, ar trebui dezvoltată o strategie de supraveghere rentabilă bazată pe riscul de CHC, iar screening-ul precoce este cheia pentru îmbunătățirea diagnosticului și tratamentului CHC cu un raport cost-eficacitate ridicat2. ..Metodele de screening precoce pentru cancer au multe limitări: metode eficiente de screening precoce nu au fost dezvoltate pentru majoritatea tipurilor de cancer, iar aderența este de obicei scăzută.În comparație cu metodele tradiționale de screening timpuriu, tehnologia biopsiei lichide are avantaje evidente: ușurința de prelevare, detectarea panracului, reproductibilitate bună a probei și răspuns eficient la eterogenitatea tumorii.Având în vedere rentabilitatea metodelor asociate cu biopsia lichidă, utilizarea lor în screeningul HCC nu a fost testată în mod obișnuit.În ciuda progreselor în detectarea precisă la nivel molecular, biopsia fluidă este costisitoare pentru a detecta HCC la pacienții țintă, limitând utilizarea sa pe scară largă în comparație cu procedurile imagistice specifice, cum ar fi ultrasunetele și imagistica prin rezonanță magnetică.113,114 Cu toate acestea, un studiu anterior a arătat că biopsia lichidă a arătat un beneficiu semnificativ în ceea ce privește anii de viață ajustați în funcție de calitate (QALY).115 Au fost demonstrate, de asemenea, beneficiile biopsiei lichide în carcinomul precoce al stomacului și nazofaringelui.116,117 Viziunea actuală este că biopsia lichidă poate completa biomarkerii serici și screening-ul radiologic în detectarea și diagnosticarea tumorilor.117 118
Conform literaturii actuale, tehnologia biopsiei fluidelor a arătat o sensibilitate și specificitate semnificativ mai mari în screening-ul precoce al grupurilor cu risc crescut pentru cancerul hepatic.Indiferent de tipul de biopsie lichidiană, poate distinge HCC de persoanele cu risc ridicat fără HCC, sugerând importanța screening-ului precoce, deoarece diferențele dintre indivizii cu risc ridicat și cei sănătoși sunt evidente.ctDNA are un timp de înjumătățire scurt și poate fi utilizat pentru a detecta HCC, astfel încât orice modificare a ADNc-ului derivat din tumoră poate oferi dovezi concrete în timp real ale progresiei tumorii, în special pentru tumorile mici.Un nivel ridicat de ADNc indică dezvoltarea și răspândirea cancerului și este un indicator precoce al progresiei și recidivei.În plus, pe baza rezultatelor ctDNA, pacienții pot primi tratament și urmărire individualizate.119 Locurile specifice de metilare pot fi un marker mai bun decât AFP pentru identificarea precoce a HCC și a nodulilor cirotici.În cazurile rezecabile de HCC, nivelurile ridicate de ADNc indică o invazie microvasculară și recidive postoperatorii și metastaze.Modificările numărului de copii sunt asociate cu supraviețuirea pacienților cu HCC.Se poate presupune că evaluarea ADNc poate fi implicată în tratamentul global al HCC, iar ADNc poate servi ca un indicator eficient al modulării terapeutice.Markerii bazați pe mutații genetice specifice în ADNc au fost adoptați de ghidurile clinice pentru a prezice eficacitatea și a monitoriza rezistența la medicamente.Testarea ctDNA poate fi cel mai util instrument de biopsie lichidă pentru screeningul precoce.CTC joacă, de asemenea, un rol cheie în depistarea timpurie a grupurilor cu HCC cu risc ridicat.Diferiți markeri ai CTC asociate cu HCC sunt de o importanță deosebită în debutul, dezvoltarea și recurența HCC.Ca vezicule membranare, exozomii sunt implicați în comunicațiile intercelulare, în special în celulele HCC.MicroARN-urile circulante sunt stabile în sânge și, prin urmare, pot fi mai utile pentru screeningul precoce al HCC.Treptat, au fost descoperite proteine ​​exosomale și exozomi bogați în ARN, iar eficacitatea lor predictivă pentru HCC a fost confirmată.Interesant este că diferite etiologii ale HCC pot fi, de asemenea, asociate cu diferite mutații, astfel încât putem selecta diferiți biomarkeri pentru screeningul precoce pe baza diferitelor etiologii ale HCC.120
Cu toate acestea, tehnicile actuale de biopsie a fluidelor sunt discutabile în ceea ce privește stabilitatea și nu pot efectua în mod independent screening-ul sau monitorizarea precoce a HCC, dar pot completa totuși screening-ul și diagnosticul individual.121 Ca formă de biopsie lichidă, detectarea și imagistica ctDNA, CTC, cfRNA și AFP sau PIVKA-II asociate cu exozomi au aplicații promițătoare în diagnosticul și prognosticul precoce al HCC.Cu toate acestea, mecanismul exact al eliberării ctDNA în sânge rămâne de elucidat.Dezvăluirea proprietăților biologice de bază ale ctDNA poate facilita utilizarea acestuia ca marker.Cantitatea mică de ADNc în circulație și cerințele stricte de manipulare a probelor sunt provocări pentru implementarea clinică a detectării ADNc în HCC.În plus, mutațiile genetice nu au caracteristici specifice care să permită identificarea exactă a agenților cancerigeni.Deoarece multiple variante genetice și somatice sunt, de asemenea, prezente în țesuturile normale, mutațiile genetice identificate prin biopsia fluidă pot fi de utilitate limitată în screening-ul precoce pentru HCC.122 Limitările țintelor genetice utile și biomarkerilor bine definite care ajută la diferențierea ADNc de ADN-ul non-tumoral sunt cele mai importante probleme în utilizarea ADNc.lipsa de utilitate a markerilor sensibili si specifici pentru detectarea CTC.Au fost găsite doar celule viabile cu potențial metastatic, iar combinația optimă de markeri îmbogățiți cu CSC a fost neclară.Izolarea CTC-urilor pentru cultură și evaluarea profilurilor lor mutaționale este, de asemenea, o sarcină dificilă.Din cauza problemelor legate de identificarea, izolarea și purificarea exozomilor, mecanismul molecular specific este încă neclar, iar studiile anterioare privind mecanismul exozomilor și HCC nu au fost aprofundate și modul în care miARN-urile, lncRNA-urile și proteinele sunt sortate în exozomi. și nu este clar dacă absorbția exozomului este un proces de tip specific.Utilizarea exozomilor pentru diagnosticul și tratamentul HCC este încă în stadiu preclinic.Lipsa standardizării procedurilor de biopsie lichidă, cum ar fi tipul de tuburi utilizate pentru colectarea sângelui, volumul de sânge, depozitarea și detectarea probelor, izolarea și îmbogățirea, poate împiedica utilizarea acestora în practica clinică de rutină din cauza diferențelor de practici între centrele medicale.Eficacitatea biopsiei lichide în screeningul precoce, diagnosticul, evaluarea eficacității și predicția HCC rămâne de explorat, în special pentru grupurile cu risc ridicat.Tehnologia biopsiei lichide are un mare potențial și este de așteptat să fie utilizată pe scară largă în practica clinică a cancerului hepatic în viitorul apropiat.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL și colab.Statistici globale de cancer 2020: GLOBOCAN estimează incidența și mortalitatea de la 36 de tipuri de cancer în 185 de țări.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Sediul Comisiei Naționale de Sănătate.Criterii pentru diagnosticul și tratamentul cancerului hepatic primar (ediția 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z și colab.Ghid pentru diagnosticul și tratamentul carcinomului hepatocelular (ediția 2019).Cancer de ficat.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Orientări de practică clinică pentru carcinomul hepatocelular: Societatea Japoneză pentru Boli de Ficat, 2017 (orientările 4 JSH-HCC), actualizare 2019.Rezervor pentru boli hepatice.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biopsie lichidă în boala cronică de ficat.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biopsie lichidă a cancerului de sân: o revizuire concentrată.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Supravegherea carcinomului hepatocelular: cele mai bune practici actuale și direcții viitoare.Gastroenterologie.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Asociația Europeană de Cercetare L, Organizația Europeană R, C Therapeutics.Ghiduri clinice EASL-EORTC: tratamentul carcinomului hepatocelular.J Heparina.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK și colab.Analiza combinată a AFP și HCCR-1 ca markeri serologici utili în carcinomul hepatocelular mic: un studiu de cohortă prospectiv.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, şi colab.Expresia diferențială a microARN-125b plasmatic în boala hepatică asociată cu virusul hepatitei B și potențialul de diagnostic al carcinomului hepatocelular indus de virusul hepatitei B.Rezervor de boli hepatice.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologia și semnificația alfa-fetoproteinei în carcinomul hepatocelular.ficat int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Orientări clinice pentru tratamentul carcinomului hepatocelular în regiunea Asia-Pacific: actualizare 2017.Organizația Internațională pentru Boli Hepatice.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Valoarea diagnostică a PIVKA-II seric în monoterapie sau în combinație cu AFP la pacienții chinezi cu carcinom hepatocelular.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Cancer pulmonar non-microcelular Biopsia fluidului umoral non-plasmatic: mai aproape de tumoră!celulă.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Liquid biopsie: actual status and future perspectives.Tratament Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biopsia cancerului pe bază de lichid: un instrument de diagnostic multimodal în oncologia clinică.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Acizi nucleici în plasma umană.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Detectarea avansată a ADN-ului tumoral circulant prin analiza dimensiunii fragmentelor.Știința traduce medicina.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Lungimea fragmentului de ADN tumoral circulant.genele PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. ADN-ul tumoral circulant: un biomarker promițător în biopsia cancerului pe bază de lichid.tumora tinta.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detectarea ADN-ului tumoral circulant în stadiile incipiente și târzii ale tumorilor maligne umane.Știința traduce medicina.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Biopsie lichidă pentru analiza predictivă mutațională a cancerului solid: perspectiva unui patolog.J Biotehnologie.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Detectarea precoce a tumorii prin screening-ul ADN-ului plasmatic circulant: hype sau speranta?Dreptul clinic belgian.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Efectul virusului hepatitei și îmbătrânirea asupra metilării ADN-ului în hepatocarcinogeneza umană.Histopatologie.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647